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高效利用秸秆的香菇新菌株选育?

作者:admin 发布时间:2020-10-26 09:26

  

  香菇(Lentinus edode)是一种药食两用菌,香气浓郁,肉质细腻可口,不仅营养价值高,而且药用价值和经济价值也很好。由于香菇属于木腐型真菌,代料栽培时对阔叶林木屑的消耗量很大,栽培成本高已成为当前阻碍香菇产业发展的一个重要因素。生产上,香菇培养料配方数十年来一直沿用78∶20∶1∶1的常规配方,新配方研究鲜见报道1。由于香菇属于白腐菌种,可产生木质素降解酶,故可尝试利用秸秆培育香菇2,3。我国是农业生产大国,农作物秸秆资源非常丰富,但由于木质素含量较高,严重影响了秸秆的降解和再利用。本研究采用紫外线诱变与杂交育种相结合的育种手段,选育适合在玉米秸秆代料培养基上生长的香菇新菌株,并对其部分生物学特性进行研究,以期为秸秆的有效利用及降低香菇培育成本提供一条新途径。 
  1材料与方法 
  1.1试验材料 
  1.1.1菌株香菇 8号和香菇L26, 由绥化学院食用菌研究所提供。 
  1.1.2培养基分离孢子所用培养基:酵母膏 3 g,蛋白胨 2 g,KH2PO4 0.46 g,K2HPO4 1 g,MgSO4 0.5 g,葡萄糖 20 g,琼脂 20 g,蒸馏水 1 000 mL,pH自然。 
  平板综合培养基:马铃薯 200 g(去皮),蛋白胨 5 g,麸皮 50 g,KH2PO4 3 g,MgSO4 1.5 g,葡萄糖 20 g,VB1 20 mg,琼脂 20 g,蒸馏水 1 000 mL,pH 自然。 
  秸秆筛选培养基:木屑20%、玉米秸秆粉68%、麦麸10%、蔗糖1%,CaSO4 1%,pH自然。玉米秸秆粉的制备:将玉米秸秆经晾干、除杂、切段(每段长约3 cm)、烘干、粉碎等预处理后过40目筛。 
  1.1.3试验仪器bl-50A型立式压力蒸汽灭菌器(上海东亚压力容器制造有限公司);SW-CJ-2F型超净工作台(苏州净化设备有限公司);HPX-9162MBE型恒温培养箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);LRH-400-GSI型人工气候箱(韶关市泰宏医疗器械有限公司)。 
  1.2试验方法 
  1.2.1单核菌丝的获得出发菌株(种菇)的处理4:适当切去种菇部分菌柄,子实体剩余部分用 75%酒精消毒处理后,置于灭菌的孢子采集装置中收集孢子。 
  孢子的分离5:用无菌水将收集到的孢子反复稀释至浓度为106个/mL,吸取适量孢子液注入孢子分离培养基上,涂布均匀后置于25℃恒温培养箱培养,约8~9 d后萌发孢子丝。 
  孢子丝的诱变:孢子丝萌发后,移置 30 W 紫外灯正下方 30 cm 处进行诱变。照射时间共设5个处理:0.5、2 、4、6、8 min,每个处理重复3次。诱变后立即用黑布包好,置于25℃恒温培养箱中继续培养。 
  单核菌丝的鉴定6:暗培养4 d左右,挑取边缘菌丝用显微镜观察鉴定。若未出现锁状联合现象,即可认为是单核菌丝,然后将其转接至斜面培养基上进行培养。观察单核菌丝的生长状况,培养12~14 d后,淘汰长势不理想的菌丝体,保留长势好的单核菌丝体作为亲本菌株用于杂交试验。 
  1.2.2配对杂交将筛选所得菌丝特性较好的菌株,两两配对接种于装有平板综合培养基的培养皿中,彼此相距1.0~1.5 cm。待培养 10~15 d后菌丝体接触,挑取接触处的菌丝镜检,出现锁状联合现象的即可认为为双核菌丝,说明杂交成功,然后转接到斜面培养基上,25℃恒温培养。 
  1.2.3拮抗试验在平板综合培养基的中间接种有效的杂交菌丝体,其两侧分别接种两亲本菌丝体,距离为2~3 cm,培养1个月后观察拮抗现象。由于同种菌丝间能够融合生长,相交处不会出现拮抗线,故只有在杂交后代与亲本菌丝间同时显示有两条黄褐色拮抗线时,此杂交后代为真正的杂合体7,8。

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